Лабораторная диагностика сибирской язвы

Лабораторная диагностика сибирской язвы

Таблица 38 — Дифференцирующие признаки видов рода Proteus

Тесты P.vulgaris P.mirabilis P.mixofaciens
Образование индола +
Реакция Фогеса-Проскауера X +
Цитрат Симмонса X X +
Орнитиндекарбоксилаза +
Образование кислоты из:
мальтозы + +
ксилозы X +
а-метилглюкозида X +
Просветление среды с тирозином + +
Образование вязкой пленки +

Приготовленной суспензией заражают внутрибрюшинно трех белых мы­шей живой массой 14-16 г в дозе 0,5 млрд. микробных клеток
(0,5 см 3 ). Патогенность считают установленной, а изучаемые штаммы протея отно­сят к возбудителю болезни в случае гибели двух и более мышей в течение трех суток после заражения.

Сибирская язва (Anthrax) — остропротекающая болезнь, характеризующая­ся признаками септицемии, интоксикации, образованием карбункулов. К си­бирской язве восприимчивы крупный рогатый скот, лошади, другие одноко­пытные, верблюды, олени, дикие травоядные всех видов. Менее чувстви­тельны свиньи, плотоядные — малочувствительны.

Возбудителем болезни является грамположительная, спорообразующая палочковидная бактерия — Bacillus anthracis, род Bacillus.

Лабораторная диагностика основана на выделении и идентификации культуры возбуди­теля, в случае необходимости проводят обнаружение антигенов возбудите­ля в исследуемом материале.

Бактериологическое исследование. Материал для исследования. Прижизненно у больного животного берут кровь (обычно из уха). Капли крови наносят в виде толстого мазка на предметные стекла, подсушивают, стекла складывают мазками внутрь, помещают между ними спички. От трупа животного берут ухо или мазок крови из сосудов уха. От трупов свиней — участки отечной соединительной тка­ни, заглоточные, подчелюстные и другие лимфатические узлы, при нали­чии в них изменений. Ухо отрезают со стороны, на которой лежит труп, предварительно перевязав двумя лигатурами, между которыми делают раз­рез. Место отреза прижигают. Если подозрение возникло в ходе вскрытия трупа (кроме трупов свиней), вскрытие прекращают, для исследования бе­рут кусочки селезенки, печени, измененные лимфатические узлы. Матери­ал помещают в стеклянную посуду (банки, пробирки). Мазки после высу­шивания кладут в чашки Петри, последние завертывают в бумагу, на ней делают надпись «Мазок нефиксирован!». Посуду с материалом помещают во влагонепроницаемую тару, опечатывают и нарочным с соответствую­щим сопроводительным документом направляют в лабораторию. Для обнаружения возбудителя сибирской язвы в сырье животного происхождения и объектах внешней среды отбор матери­ала и ход бактериологического исследования регламентирован соответ­ствующими методическими указаниями.

Микроскопическое исследование исходного материала. Проводят путем микроскопии мазков, окрашенных по Граму, а также од­ним из методов на капсулу: метиленовым синим Леффлера, по Романовско­му — Гимза, Михину, Ольту, Ребигеру. Учитывая опасность исследуемого материала для бактериолога, рекомендуется фиксировать мазки этиловым спиртом с перекисью водорода, что обеспечивает инактивацию возбудите­ля. С этой целью подсушенные на воздухе мазки выдерживают 30 минут в фиксирующей жидкости: 180 мл этанола 96° и 20 мл 30%-ного пергидроля.

Возбудитель в мазках, окрашенных по Граму, представляет крупную грамположительную палочку (5-10 х 1-2 мкм) с закругленными концами (одиночные клетки). В материале клетки располагаются преиму­щественно в виде коротких цепочек, попарно. Концы клеток, обращенные друг к другу, имеют обрезанные под прямым углом концы. В материале от свиней форма клеток может быть атипичной: короткие, толстые или изогну­тые палочки, иногда зернистые со вздутием на конце или середине клетки. В несвежем материале лизис клеток может привести к обнаружению в маз­ках «теней микробов», представляющих более устойчивые к гниению кап­сулы возбудителя. В препаратах, окрашенных специальными методами, клетки окружены капсулой, у парных клеток и в коротких цепочках она общая для нескольких клеток. При окраске метиленовым синим Леффлера клетки синего цвета окружены розовым капсулярным материалом, что счи­тается характерным для B.anthracis. В мазке, окрашенном по методу Гимзы, капсулы бледномалинового цвета.

В организме животного, в невскрытых трупах возбудитель споры не образует, для их формирования необходимы: доступ кислорода, темпера­тура 26-30° С, нейтральная или слабощелочная реакция окружающей среды.

В мазках из материала при микроскопическом исследовании могут быть обнаружены клетки морфологически сходных бактерий, например — C.perfringens (крупные, грамположительные, капсулообразующие).

Клетки В. anthracis могут быть дифференцированы от C.perfringens ок­раской препаратов по Романовскому. При этом капсула В. anthracis имеет почти прямоугольную форму, четкий контур, красно-лиловый цвет, а капсу­ла С. perfringens имеет овальную форму и голубой цвет.

При наличии сибиреязвенных люминесцирующих сывороток препара­ты окрашивают ими в прямом варианте МФА. Имеющиеся люминесцент­ные сыворотки дают перекрестные реакции с В. cereus. Обнаружение в маз­ках светящихся клеток позволяет подозревать наличие в материале возбу­дителя сибирской язвы.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Лабораторная диагностика сибирской язвы

Прочитайте:

  1. E. АИВ инфекциясына серодиагностика
  2. II. Диагностика
  3. II. Диагностика
  4. II. Диагностика
  5. II. Диагностика
  6. III. Диагностика лекарственной аллергии
  7. III. Лабораторная диагностика хронического панкреатита
  8. IV) Травматические повреждения периферический нервов и сплетений. Клиника, диагностика, лечение, виды операций.
  9. IV. Диагностика
  10. IV. Дифференциальная диагностика

Для лабораторной диагностики сибирской язвы применяют мик­роскопический, бактериологический, биологический и серологичес­кие методы исследования, кожную аллергическую пробу и полимеразную цепную реакцию (ПЦР).

Материал для исследования зависит от клинической формы за­болевания, это: отделяемое везикул, карбункулов и язв, струпы, кровь, мокрота, испражнения, моча, пунктаты лимфоузлов, ликвор и аутоп-сийный материал.

Лабораторную диагностику проводят в специатьных лаборато­риях с соблюдением правил работы с особо опасными инфекциями.Этих же правил придерживаются при взятии и транспортировке пато­логического материала

Микроскопические исследования. Мазки из исследуемых ма­териалов окрашивают по Граму. Для выявления капсулы применяют методы Бурри-Гинса, Ребигера и другие. Наличие в мазках крупных грамположительных палочек, образующих короткие цепочки, окружен­ные общей капсулой, позволяют дать предварительный ответ в тече­ние одного часа. Иногда мазки окрашивают по методу Ожешке для обнаружения спор.

Дополнительно применяют прямой метод иммунофлюоресцен-пии со специфической сибиреязвенной люминеецируювдей сыворот­кой, служащий подтверждением результатов микроскопического исследования.

Бактериологический метод. Выполняют посевы исследуемого материала на чашки с МПА, кровяным агаром, на среды с сывороткой (для выявления капсулы), пол им икс и ново-желточный агар. Кровь и ликвор параллельно засевают на жидкие питательные среды.

В положительном случае, после суточной инкубации при 37°С, на чашках вырастают характерные R-колонии. Их исследуют и выде­ляют- чистую культуру, которую идентифицируют (см. ниже).

Биологическая проба. Одновременно с посевами на питатель­ные среды, исследуемый материал подкожно вводят мышам, морским свинкам или кроликам. Обычно через сутки мыши погибают Из их крови и органов готовят мазки-отпечатки (с целью обнаружения ха­рактерных капсульных палочек) и проводят посевы на питательные среды для выделения чистой культуры возбудителя. Через сутки часть выживших животных забивают и осуществляют аналогичные иссле­дование. За остальными животными наблюдают в течение 10 суток.

Идентификация выделенной чистой культуры возбудителя. Ее проводят с учетом широкого распространения непатогенных и ус­ловно-патогенных спороносных бацилл, обладающих сходной мор­фологией и рядом других общих свойств с сибиреязвенными бактериями. Для дифференциации используют комплекс признаков, присущих только B.anthracis:

наличие капсул в организме человека и животных и калсулооб-
разование на сывороточных средах;

фаголизабельность специфическим сибиреязвенным бактерио­
фагом;

отсутствие гемолиза при росте колоний на кровяном агаре (не
вполне надежный признак, так как некоторые почвенные бацил­
лы также не дают гемолиза),

положительный тест «жемчужного ожерелья». Он заключается в

посеве трехчасовой бульонной испытуемой культуры на пени-циллиновый агар, на котором под действием пенициллина, на­рушающего синтез пептидогликана, цепочки палочковидных бактерий превращаются в «ожерелье» из шаровидных форм (сфе-ропластов), что выявляют при фазово-контрастной микроскопии.

вирулентность для мышей, морских свинок и главное — кроликов,
так как некоторые бациллы, например В.cereus, введенные в боль­
ших дозах, могут вызывать гибель мышей и морских свинок.

Кроме выявления этих признаков проводят биохимическое тес­
тирование в системе API 20A или определяют протеолитические
(B.anthracis разжижает желатину в виде «перевернутой елочки»)
и сахаролитические свойства (ферментирует с образованием
кислых продуктов лактозу, глюкозу и мальтозу, вызывает покрас­
нение лакмусового молока)

Серологическую идентификацию проводят методом прямой им-
мунофлюоресценции.

На основании результатов идентификации испытуемой культуры ставят окончательный диагноз сибирской язвы. Однако, выделить куль­туру возбудителя удается далеко не всегда, например при кожной фор­ме — менее чем в 50% случаев, что связано, главным образом, с ранним началом лечения антибиотиками.

Серологический метод. Его применяют для выявления сибире­язвенного антигена или возбудителя непосредственно в патологичес­ком материале в ранние сроки заболевания. Используют экспресс-методы: прямой РИФ, РИГА с эритроцитарным антительным диагностикумом (РОНГА), ИФА.

Антитела в сыворотке крови больных выявляют реже, в основ­ном при кожной форме заболевания. Применяют РИГА (с эритроцитар­ным антигенным диагностикумом), а в последнее время применяют тест-системы ЛФА с капсульным, протективным антигенами или леталь­ным токсином, позволяющие выявлять соответствующие антитела.

По наличию специфических антител у переболевших устанавли­вают ретроспективный диагноз сибирской язвы.

Сохраняет свое значение реакция термопреципитации Асколи, основное назначение которой — определение зараженности различно­го животного сырья (кожа, шкуры, шерсть., щетина и др.), атакже объек­тов внешней среды, трупов людей и животных, даже разложившихся.

Для постановки реакции Асколи готовят термопреципитиноген из исследуемого материала, который измельчают, кипятят в изотони­ческом растворе NaCl и фильтруют. Прозрачный преципитиноген на­слаивают на сибиреязвенную сыворотку, налитую в узкую пробирку. В положительном случае на границе двух жидкостей образуется мут­но-белое кольцо преципитата. Одновременно ставят контроль с нор­мальной сывороткой, где преципитация должна отсутствовать.

Раньше эту реакцию использовали и для прижизненной диагнос­тики кожной формы сибирской язвы (термопреципитиноген готовили из струпа, покрывающего карбункул), но в настоящее время для этой цели реакцию Асколи почти не применяют.

Кожно-аллергичеекая проба Ее ставят для выявления аллергиза-ции организма (развит ие ГЗТ), возникающей при сибиреязвенной инфек­ции и сохраняющейся в течение многих лет у переболевших. Аллерген-антраксин вводят в объеме О Л мл внутрикожно в ладонную поверхность предплечью. Результат учитывают через 24 и 48 часов. Реак­ция считается положительной при наличии инфильтрата и гиперемии ди­аметром 16-25мм и резко положительной, если диаметр 26мм и более. Положительную кожно-аллергическую пробу наблюдают у больных и переболевших кожной формой сибирской язвы почти в 90% случаев.

Подимеразная цепная реакция (ПЦР)является перспективным, чувствительным экспресс-методом, позволяющим выявлять присут­ствие ДНК возбудителя сибирской язвы в патологическом материале. взятом от больных, в том числе во время лечения антибиотиками., а также в объектах внешней среды. В настоящее время разработаны и апробированы на практике диагностические тест-системы, содержа­щие набор ингредиентов для постановки ПЦР.

Дата добавления: 2014-12-11 | Просмотры: 3992 | Нарушение авторских прав

Лабораторная диагностика сибирской язвы

Цель занятия: изучить методы диагностики сибирской язвы. Материалы и оборудование: световой микроскоп, вакцина против сибирской язвы.

Место проведения занятия: лаборатория кафедры эпизоотологии.

Сибирская язва — остропротекающая болезнь сельскохозяйственных животных многих видов. Болеет и человек. Возбудитель — Bacillus anthracis.

При постановке диагноза на сибирскую язву используют весь комплекс диагностических методов — эпизоотологический анализ, клинические, патологоанатомические и лабораторные исследования.

Общий принцип эпизоотологического анализа, или обследовав ния, хозяйства изложен в занятии 6. Возбудитель сибирской язвы может распространяться через секреты и экскреты больных животных, продукты убоя, трупы, а также посредством кровососущих насекомых. Особенно опасны места захоронения трупов животных и стоячие водоемы.

Если болезнь возникла в период стойлового содержания животных, выясняют условия их кормления и происхождение кормов (споры сибирской язвы могут быть занесены с корнеплодами, сеном и мясокостной мукой); если в пастбищный период — обследуют участки, где паслись животные. Необходимо выяснить, велись ли вблизи фермы или пастбищ земляные работы, и собрать сведения за предельно большой срок о случаях появления сибирской язвы в данной местности.

Клиническое обследование животных начинают с измерения температуры тела (при сибирской язве она повышена). Болезнь выражается также отказом от корма, резким припуханием лимфатических узлов, отеком подчелюстного пространства, у дойных коров — Маститом. У свиней обнаруживают разлитую отечность тестоватой Консистенции в подчелюстном пространстве.

При патологоанатомическом исследовании отмечают характерные для сибирской язвы признаки: отсутствие трупного окоченения, сильное вздутие трупа, отеки в подкожной клетчатке, пенисто-кровянистые истечения из естественных отверстий, синюшную окраску видимых слизистых оболочек и кровоизлияния на них. Однако следует иметь в виду, что весь комплекс указанных изменений наблюдают не всегда, поэтому окончательный диагноз устанавливают только после лабораторного исследования.

Лабораторная диагностика при сибирской язве включает в себя микроскопию мазков из исходного патологического материала, выделение чистой культуры посевом на питательные среды, биопробу. При необходимости ставят реакцию преципитации, идентифицируют выделенные культуры культурально-биохимическими методами.

Для исследования на сибирскую язву в лабораторию направляют ухо, перевязанное у основания, или мазок крови, взятой из надреза уха; от трупов свиней — участки отечной соединительной ткани и заглоточные, а также другие лимфатические узлы с характерными патологоанатомическими изменениями. Если подозрение на сибирскую язву возникло при вскрытии трупа животного (кроме трупов свиней), вскрытие прекращают и на исследование направляют часть селезенки.

Мазки микроскопируют немедленно, результаты срочно сообщают в хозяйство, направившее материал. Мазки фиксируют этиловым спиртом с добавлением 3 % пероксида водорода, окрашивают по Граму, на капсулы — по методу Ребигера, Михина, Ольта или Романовского— Гимзы и на споры — по методу Пешкова, Ауески, Трихинелье и Златогорова. Если в лаборатории есть люминесцирующие сыворотки, используют метод флюоресцирующих антител.

В мазках, окрашенных по Граму, сибиреязвенные бактерии располагаются короткими цепочками или попарно, концы, обращенные друг к другу, резко обрублены, свободные концы обычно закруглены. При окраске на капсулы мазков из свежего материала сибиреязвенные палочки окружены капсулой, из несвежего —бактерии несколько увеличены, иногда отмечают «тени», а вместо капсул — слабоокрашенные обрывки. При обработке препаратов люминесцирующими сыворотками в мазке обнаруживают специфическое свечение, свидетельствующее о наличии в исследуемой пробе возбудителя сибирской язвы.

Посевы из исходного материала делают в МПБ и на МПА или в бульон и на агар Хоттингера. Посевы инкубируют 18…24 ч при температуре 37 °С, при отсутствии роста выдерживают при той же температуре еще 48 ч.

После суточного роста сибиреязвенных бактерий МПБ остается прозрачным, на дне образуется рыхлый осадок, напоминающий комок ваты. При встряхивании пробирки бульон не мутнеет, осадок разбивается на мелкие хлопья. Мазки из бульонной культуры окрашивают по Граму и исследуют под микроскопом. В мазках обнаруживают цепочки, состоящие из сибиреязвенных палочек.

На плотных питательных средах возбудитель сибирской язвы образует плоские матово-серые шероховатые колонии. Центр колоний затемнен, периферия бахромчатая, с локонообразными отростками.

Для биопробы используют лабораторных животных, восприимчивых к сибирской язве: белых мышей, кроликов, морских свинок. Исследуемый материал суспендируют в небольшом объеме 0,9%-го раствора хлорида натрия, вводят двум белым мышам в дозе 0,2…0,5 мл под кожу спины ближе к корню хвоста или 0,5…1,0 мл двум морским свинкам подкожно в область живота. За животными, зараженными суспензией из исходного материала или культурой возбудителя, наблюдают в течение 10 сут. Зараженные животные гибнут через 1…3 сут, иногда позже. Трупы вскрывают, делают мазки и посевы на питательные среды из крови сердца, селезенки, печени, а также инфильтрата, образовавшегося на месте инъекции исследуемого материала.

Сроки исследований: микроскопического — в день поступления материала, бактериологического—до 3 сут, биологического (биопроба) — 10 сут.

Кожевенное сырье на сибирскую язву исследуют в реакции преципитации (РП). Перед ее постановкой свежий патологический материал предварительно выдерживают в термостате в течение 18…20 ч, несвежий сразу экстрагируют горячим или холодным способом. При этом следует учитывать, что в экстрактах, полученных горячим способом, меньше преципитиногенов.

При горячем способе экстрагирования кусочки исследуемого материала (1…2г) помещают в пробирку или колбу, заливают 0,9%-м раствором хлорида натрия в соотношении 1 : 10 и кипятят 30…40 мин на водяной бане. При холодном кусочки материала (1…2г) растирают в ступке с песком, переносят в колбу или баночку, заливают 0,9%-м фенолизированным раствором хлорида натрия в соотношении 1 : 10 и оставляют на 16…18 ч при температуре 20 ± 2 °С.

Полученные экстракты фильтруют через асбестовую вату до ‘ прозрачности, при этом первые капли фильтрата удаляют.

РП ставят методом наслаивания или подслаивания.

При наслаивании в уленгутовскую пробирку наливают 0,2…0,3 мл прозрачной преципитирующей сибиреязвенной сыворотки, затем осторожно наслаивают равное количество экстракта так, чтобы между. Компонентами образовалась ясно выраженная граница (тонкая прямая линия). При подслаивании в уленгутовскую пробирку сначала вносят 0,2…0,3 мл экстракта, затем под него осторожно пастеровской пипеткой подслаивают равное количество преципитирующей сыворотки.

Если при соединении компонентов резко выраженная граница между ними отсутствует, опыт повторяют. Одновременно ставят контроль преципитируюшей сибиреязвенной сыворотки со стандартным сибиреязвенным антигеном: при положительной реакции в течение 1…2 мин после соединения компонентов появляется характерное кольцо.

РП считают положительной, если через 1…2 мин и не позже чем через 15 мин на границе между компонентами появилось тонкое беловатое кольцо.

При отрицательном результате РП с экстрактом, полученным горячим способом, опыт повторяют с экстрактом, полученным холодным способом.

ЗАДАНИЯ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ

1. Приготовить мазки из вакцинного штамма и промикроскопировать их.

2. Разработать схему дифференциальной диагностики сибирской язвы от коликов, тимпании, отравления.

Инфекции человека

  • Бактериальные инфекции (41)
  • Биохимия (5)
  • Вирусные гепатиты (12)
  • Вирусные инфекции (43)
  • ВИЧ-СПИД (28)
  • Диагностика (30)
  • Зооантропонозные инфекции (19)
  • Иммунитет (16)
  • Инфекционные заболевания кожи (33)
  • Лечение (38)
  • Общие знания об инфекциях (36)
  • Паразитарные заболевания (8)
  • Правильное питание (41)
  • Профилактика (23)
  • Разное (3)
  • Сепсис (7)
  • Стандарты медицинской помощи (26)

Лабораторная диагностика сибирской язвы

Возбудитель сибирской язвы Ваcillus anthracis обычно содержится в больших количествах в содержимом карбункула, а также может быть обнаружен в крови, мокроте, спинномозговой жидкости, мазках из ротоглотки, испражнениях кишечника.

К методам экспресс-диагностики относятся: бактериоскопия с окраской по Граму, когда обнаруживаются характерные большие палочки с наличием капсулы, окрашиваются положительно и располагаются в виде цепочки; а также метод иммунофлуоресценции.

Важную роль в лабораторной диагностике сибирской язвы играют бактериологические методы с посевом исследуемого материала на кровяной агар или жидкие питательные среды. Правда, при легочной и септической формах из-за быстрого прогрессирования болезни результаты получают уже посмертно. Параллельно с высевом материала на искусственные питательные среды проводится заражение морских свинок внутрибрюшинно с целью определения вирулентности возбудителя ( биологическая проба ). Животные погибают в течение 24 часов, при этом получают культуру возбудителя из крови, взятую из полости сердца.

Тест на определение антител также может быть полезным, особенно при кожной форме болезни, когда есть время для исследования парных сывороток крови.

В клиническом анализе крови при лёгком течении болезни особых изменений не выявляется, однако при генерализованных формах, как правило, наблюдается нейтрофильный лейкоцитоз со сдвигом влево, тромбоцитопения.

Для быстрого определения инфицированности спорами сырья животного происхождения, мяса могут быть использованы реакция термопреципитации методом Асколи или метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) .

Бактериологическая диагностика важнейших инфекционных заболеваний. Сибирская язва

Бактериологическая диагностика сибирской язвы осуществляется микроскопическим исследованием, получением культур, заражением опытных животных и реакцией преципитации по Асколи.

Материалом для исследования обыкновенно елужит ухо или толстые мазки крови периферических сосудов трупа животного и, если произведено вскрытие, — кусочек селезенки.

У свиней исследуются лимфатические узлы области поражения (ретрофарингеальные, мезентериальные), селезенка и особенно инфаркты в ней.

При микроскопическом исследовании свежего материала для сибиреязвенных бацилл характерно:
1) расположение в виде коротких, иногда и длинных цепочек с вдавленными внутрь или резко обрубленными обращенными друг к другу концами у отдельных палочек;
2) положительная окраска по Граму и
3) наличие капсулы.

Для более ясной видимости капсулы мазки окрашивают по методу Романовского — Гимза, Ольта, Ребигера и др. Хорошие результаты получаются и при окраске фуксином Циля или синькой Леффлера в течение 2—3 мин. с последующим легким и быстрым смыванием краски водой, б последнем случае палочки окрашиваются в синий цвет, капсула — в розовокрасный.

Наличие перечисленных морфологических признаков при микроскопическом исследовании материала от трупа позволяет лаборатории предварительно диагносцировать сибирскую язву для немед ленного принятия соответствующих мер на месте согласно существующей инструкции.

Микроскопическое исследование разложившегося материала не дает ясной картины: наряду с характерными бациллами сибирской язвы видны как бы изъеденные, с закругленными концами палочки, без капсулы или только с обрывками ее.

Одновременно с микроскопическим исследованием производится посев патологического материала на агар в чашках Петри. Высевы из материала с признаками разложения производят после предварительного прогревания приготовленной в физиологическом растворе эмульсии в течение 30 мин. при 70°. Выросшие через 18—24 часа изолированно расположенные колонии изучают микроскопически при малом увеличении и из характерных для Вас. anthracis колоний (завитки волос) приготавливаются мазки и окрашиваются по Граму. Из этих же колоний производят отвивки на косой агар и бульон для получения чистых культур и, если представляется необходимым, приготавливают эмульсию в физиологическом растворе для последующего заражения лабораторных животных.

Для окончательного подтверждения диагноза производят подкожное введение мышам или морским свинкам материала (кровь, часть сосуда уха с кровью или частицами подкожной ткани, часть колонии), эмульгированного в физиологическом растворе. Привитые животные при наличии в материале Вас, anthracis Обычно погибают через 1—3 дня.

При вскрытии у лабораторных животных обнаруживают студенистый инфильтрат в ткани на месте прививки и увеличение селезенки. Обнаружение у павших животных типичных бацилл с капсулами и получение чистых культур из крови сердца, пульпы селезенки и инфильтрата окончательно подтверждают диагноз.

При получении отрицательных или неясных результатов выделения культуры и заражения опытных животных, особенно при исследовании сильно разложившегося материала, необходимо, для выяснения диагноза, проводить реакцию преципитации по Асколи.

С этой целью 1,0—2,0 измельченного материала заливают в пробирке или колбочке 10 мл физиологического раствора и прогревают в водяной бане 10—15 мин. при 100°. Полученный экстракт фильтруют до полной прозрачности и осторожно наслаивают на иммунную преципитирующую противосибиреязвенную сыворотку, налитую в маленькую уленгутовскую пробирку. Появление сразу же или не позднее 15 мин. мутного беловатого кольца на границе двух жидкостей при отсутствии подобной реакции в контроле свидетельствует о наличии сибиреязвенной инфекции.

При бактериологической диагностике возбудителя сибирской язвы необходима диференциация его от антраксоподобных непатогенных бацилл.
В отличие от антраксоподобных бацилл характерным для Вас. anthracis является отсутствие гемолиза при росте на кровяном агаре (15—25%)

Сибирская язва (углевик)

Сибирская язва (углевик)

Сибирская язва (углевик) – это острое инфекционное зоонозное заболевание, характеризующееся тяжелой интоксикацией, лихорадкой и протекающее в кожной, легочной и кишечной формах.

Сибирская язва известна с давних времен. Еще в Библии описана болезнь, симптомы которой напоминают сибирскую язву. Со времен Гомера, Галена, Цельса и Виргилия, болезнь фигурирует под названием «священный огонь» (ignis sacer) или «персидский огонь» (ignis persicus).

Первые сообщения о сибирской язве в России можно найти в Никоновской летописи (979 г.). В связи с сильными эпизоотиями в 1640 г. вышел царский указ, запрещавший снимать шкуры с павших животных, а трупы закапывать глубоко в землю. С.С. Андреевский, изучивший заболевание во время эпидемии на Урале (1786-1788 гг.), дал ему название «сибирская язва», а в 1788 г. путем самозаражения доказал единство этиологии сибирской язвы у людей и животных. Возбудитель был открыт А. Поллендером в 1849 г.. Чистую культуру возбудителя получил Р. Кох (1876 г.), а в 1881 г. Л. Пастер создал живую вакцину для иммунопрофилактики заболевания. В 1902 г. Асколи разработал диагностическую реакцию кольцепреципитации.

Вид – Bacillus anthracis (от греч. аnthrax – уголек)

Очень крупные палочки с обрубленными концами размером 5-10×1-2 мкм; жгутики отсутствуют; в организме человека и животных, а также на питательных средах с кровью образуют макрокапсулу белковой природы; в присутствии О 2 формируют центрально расположенные овальной формы споры; грамположительные; в мазках располагаются цепочками с утолщениями на концах (напоминают «бамбуковую трость»); обработка культур пенициллином приводит к разрушению клеточной стенки и образованию цепочек, состоящих из протопластов (в виде «жемчужного ожерелья»); споры окрашиваются по методу Ожешко в красный цвет; капсула выявляется по методу Бури-Гинса и Романовского-Гимзе.

Факультативный анаэроб, оптимальная температура культивирования 35-37 0 С, рН 7,2-7,6, хорошо растет на обычных питательных средах (МПА, МПБ). Через 17-24 часа образует R-форму колоний – серебристые крупные зернистые колонии, от краев отходят пучки нитей (в виде «головы Медузы» или «львиной гривы»), редко – S- и М-формы. На бульоне растет в виде ватных хлопьев, не вызывая помутнения среды. Дает характерный рост при посеве уколом в желатин – в виде «перевернутой елочки». На кровяном агаре гемолиза не дает.

Ферментирует большинство сахаров (глюкозу, сахарозу, декстрин, трегалозу, фруктозу, крахмал) до кислоты без газа. Положительная реакция Фогес-Проскауэра (образует ацетилметилкарбинол при ферментации глюкозы с окрашиванием среды в красный цвет). Разжижает желатин, восстанавливает нитраты в нитриты, образует сероводород и аммиак, индол не образует, пептонизирует молоко.

1. О-антиген – соматический, термостабильный липополисахарид клеточной стенки, группоспецефический (выявляется в реакции колцепреципитации по Асколи).

2. К-атиген – капсульный, полипептидный, видоспецифический.

3. Протективный антиген – белковый токсин – обладает выраженными иммуногенными свойствами, т.к. к нему образуются антитела, обладающие защитными свойствами.

Токсины. Bacillus anthracis выделяет экзотоксин, имеющий сложную структуру – состоит из трех компонентов: протективного антигена, летального и отечного факторов.

Протективный антиген – взаимодействует с мембранами клеток и опосредует проявление активности других компонентов.

Летальный фактор («мышиный токсин») – проявляет цитотоксический эффект и вызывает отек легких.

Отечный фактор – повышает концентрацию цАМФ, вызывая развитие отеков.

Эти компоненты по отдельности токсическое действие не проявляют!

Синтез экзотоксина контролируется плазмидой.

Ферменты – протеазы, обеспечивающие инвазию и приводящие к деструкции тканей.

Структурные и химические компоненты клетки: капсула (участвует в адгезии и защищает от фагоцитов), споры (обеспечивают длительное сохранение во внешней среде).

Вегетативные формы малоустойчивы. Напротив, споры – очень устойчивы во внешней среде: при 100С – более 1 часа, автоклавирование при 121С – 15-20 минут, сухой жар при 140С – 2-3 часа; дезинфицирующие средства (10% раствор формалина и 5% раствор карболовой кислоты) – 6-8 часов; в почве, в шкурах зараженных животных – сохраняются десятилетиями (30 и более лет). Чувствительны к стрептомицину, левомицетину, тетрациклину и другим антибиотикам.

Типичный зооноз. Среди животных наиболее восприимчивы травоядные (КРС, лошади, свиньи). Животные заражаются при заглатывании спор во время выпаса или при поедании загрязненных кормов.

Источник инфекции – больные животные (выделяют возбудителя сибирской язвы с мочой и испражнениями). Значительную эпидемиологическую опасность представляют скотомогильники, особенно если трупы животных, павших от сибирской язвы были зарыты без надлежащих предосторожностей.

— Прямой контактный (при контакте с инфицированным материалом – уходе за больными животными, убое, разделке туш);

— Алиментарный (при употреблении в пищу мяса больных животных);

— Воздушно-капельный, воздушно-пылевой (при вдыхании спор возбудителя);

-Возможен трансмиссивный путь (через укусы кровососущих насекомых – слепней и мух).

Инкубационный период – 2-3 суток.

Патогенез и клинические особенности.

В зависимости от места входных ворот выделяют:

Кожная форма (чаще) – во входных воротах сначала больные отмечают усиливающийся кожный зуд, затем появляется красноватое пятно, быстро трансформирующееся в папулу медно-красного цвета, через несколько часов на месте папулы образуется везикула с серозно-геморрагическим содержимым, из-за сильного зуда больные часто срывают везикулу, либо она лопается сама, и на ее месте образуется черный увеличивающийся в размерах струп (напоминает уголек), струп окружен инфильтратом в виде багрового вала. Кожная форма сопровождается повышением температуры тела до 39-40 0 С, длится примерно 5-6 дней, летальность не более 5%.

Легочная форма – протекает очень тяжело, развивается пневмония по типу отека легких, в большинстве случаев заканчивается летально (смерть наступает на 2-3 сутки вследствие сердечно-сосудистой недостаточности).

Кишечная форма – проявляется повышением температуры до 39-40 0 С, рвотой и диареей с кровью, заканчивается летально в 100% случаев.

При всех формах возможно развитие диссеминированной инфекции.

Постинфекционный иммунитет – гуморальный антимикробный и антитоксический напряженный (повторные заболевания возможны, но редко). Развивается ГЗТ.

Наиболее достоверным является бактериологическое исследование,заканчивающееся выделением чистой культуры возбудителя и ее идентификацией с использованием теста «жемчужного ожерелья», которое появляется на питательном агаре с пенициллином вследствие превращения бактерий в протопласты. Для выявления зараженности сырья (меховых шкурок,кожи и т.д.) используют реакцию термопреципитации Асколи. Для определения зараженных животных используют кожно-аллергическую пробу

Проводится вакцинация по эпидпоказаниям, а также планово – группам риска (военным, животноводам) живой сибиреязвенной сухой вакциной СТИ (высушенная взвесь живых безкапульных Bacillus anthracis) или комбинированной вакциной (СТИ+протективный антиген).

Неспецифическая профилактика (большая роль):

— Изоляция больных животных;

— Сжигание трупов погибших животных;

— Санитарный надзор за предприятиями, перерабатывающими животное сырье и т.д.

Специфическое лечение – лошадиный противосибиреязвенный иммуноглобулин.

ПЦР-диагностика сибирской язвы

Сибирская язва – особо опасная инфекционная болезнь человека, сельскохозяйственных и диких животных всех видов. Возбудитель сибирской язвы — Bacillus anthracis, грамположительная спорообразующая бактерия.

Исследование на сибирскую язву включает микроскопию мазков из исходного материала, высевы на питательные среды, постановку основных и дополнительных тестов идентификации, использование метода флуоресцирующих антител для обнаружения антигенов и антител к ним, постановку ПЦР, биопробы и реакции преципитации.

В факторы патогенности возбудителя сибирской язвы входит образование капсулы, обладающей антифагоцитарной активностью и адгезивными свойствами, и образование термолабильного экзотоксина. Токсинообразование и капсулообразование детерминированы, соответственно, плазмидами pXO1 и pXO2. Отсутствие хотя бы одной из этих плазмид приводит к значительному снижению вирулентности вплоть до полной ее утраты. Метод ПЦР позволяет определить наличие в образце патогенных штаммов возбудителя сибирской язвы по наличию специфических для них плазмид pXO1 и pXO2. Основное преимущество метода ПЦР для обнаружения возбудителя сибирской язвы — это высокая чувствительность метода, позволяющая исследовать биологические материалы без этапа культивирования, а также проводить мониторинг воды и почвы на наличие спор сибирской язвы.

Реагенты для выявления сибирской язвы

Набор реагентов АмплиСенс® Bacillus anthracis-FRT позволяет выявлять вегетативные и споровые формы Bacillus anthracis в биологическом материале и объектах окружающей среды, а также их плазмидный состав путем выявления генов pagA (плазмида pXO1) и capA (плазмида pXO2); выявляются диплазмидные и моноплазмидные штаммы Bacillus anthracis.

Биоматериалы: вода (сточная, из водоема, питьевая); почва, смывы с воздушных фильтров, порошкообразные вещества (корма для крупного рогатого скота, мука и т.д.); материал от людей (цельная кровь, экссудат из очагов поражения, мокрота); материал от животных (цельная кровь, молоко, паренхиматозные органы и лимфоузлы). Выбор материала для исследования зависит от клинической формы сибиреязвенной инфекции. При кожной форме исследуют экссудат из очагов поражения (содержимое пузырьков, отделяемое карбункула или язвы), при кишечной — фекалии и мочу, при легочной — мокроту, при септической — кровь.

Набор реагентов включает комплект для экстракции ДНК «ДНК-сорб-В». Реагент Муколизин для предварительной обработки мокроты приобретается отдельно.

Нормативные документы

МУК 4.2.2413-08 Лабораторная диагностика и обнаружение возбудителя сибирской язвы (Скачать)

Лабораторная диагностика сибирской язвы

Лабораторная диагностика сибирской язвы в первую очередь предусматривает выделение возбудителя. Основная схема лабораторного исследования патологического материала включает: микроскопию окрашенного мазка, посев на питательные среды, заражение лабораторных животных.

Перед микроскопированием мазок окрашивают по Граму раствором Ребигера. Микроскопию можно сочетать с люминесцентно-серологическим анализом. При окраске по Ребигеру капсулы приобретают красно-фиолетовый цвет, бактерии — темно-фиолетовый. Сибиреязвенные бактерии, обработанные люминесцирующей сывороткой, дают яркое свечение периферии клетки с обнаружением характерной морфологии.

В качестве сигнальных используют люминесцентно-серологический метод, пробу со специфическим бактериофагом, методы выявления капсулообразования на среде ГКИ или посредством ускоренной биопробы (внутрибрюшинным заражением мышей).

Для быстрой дифференциации колоний сибиреязвенного микроба от колоний спорообразующих сапрофитов при исследовании как материала от больного, так и объектов внешней среды используется дифференциально-диагностическая среда производства Ставропольского НИИВС. Принцип работы со средой основан на обнаружении фосфатазной активности спорообразующих сапрофитов. Сибиреязвенный микроб фосфатазной активностью не обладает. Первичные посевы или пересевы подозрительных культур инкубируют на этой среде при 37±1°С в течение 18-24 ч. При наличии роста в крышку чашки Петри вносят 1-2 мл 25% водного раствора аммиака.

Чашку (крышкой вниз) выдерживают при 20 ± 2° С в течение 1 мин, после чего проводят учет теста. Колонии сапрофитов окрашиваются в розовый цвет, колонии сибиреязвенного микроба остаются бесцветными.

В целях выделения чистой культуры производят посев на МПА и МПБ. После подращивания выделенные культуры идентифицируют на основании наиболее характерных для возбудителя сибирской язвы признаков: ставят пробы с сибиреязвенным бактериофагом, пенициллином (тест «жемчужного ожерелья»), выявляют отсутствие гемолиза, летициназной и фосфатазной активности, оценивают способность к капсулообразованию.
Заражение лабораторных животных имеет целью как выделение чистой культуры, так и оценку ее вирулентности (на основании определения ДСЛ и ЛД50).

Лабораторная работа по выделению и дифференциации палочки сибирской язвы должна проводиться в особых режимных условиях, предупреждающих возможность инфицирования персонала и обсеменения окружающей среды.

В качестве диагностического теста используется также кожная аллергическая проба с аллергеном-антраксином. Внутрикожная инъекция антраксина в случае наличия у человека заболевания сибирской язвой влечет развитие гиперемии и инфильтрата. Реакцию с антраксином ставят на внутренней поверхности верхней трети предплечья. Антраксин вводят с соблюдением правил асептики строго внутрикожно в дозе 0,1 мл. В кожу другого предплечья в качестве контроля вводят в той же дозе другим шприцем стерильный 0,9% раствор натрия хлорида. Учет реакции проводят через 24 и 48 ч в соответствии с наставлением по применению препарата.

Положительную антраксиновую пробу не принимают во внимание у лиц, вакцинированных против сибирской язвы в течение предшествовавших 12 мес, а также у лиц, в прошлом переболевших сибирской язвой.

Диагноз сибирской язвы у человека считается установленным при наличии соответствующей клинической картины, эпидемиологического анамнеза, подтвержденных одним из перечисленных способов: выделением возбудителя из патологического материала; обнаружением его в предполагаемом источнике или факторе передачи; положительной пробой с антраксином.

Диагностика и дифференциальная диагностика

Диагноз ставят на основании анализа эпизоотологических данных, клинических признаков и результатов аллергического, серологического, патологоанатомического, бактериологического и биологического исследований. Лабораторную диагностику сибирской язвы проводят в соответствии с действующими Методическими указаниями по лабораторной диагностике сибирской язвы у людей и животных, обнаружению возбудителя в сырье животного происхождения и объектах внешней среды.

Для постановки прижизненного диагноза на сибирскую язву у свиней применяют сибиреязвенный аллерген (антраксин). Он может быть использован для прижизненной диагностики и оценки иммунитета у привитых против сибирской язвы лошадей, крупного и мелкого рогатого скота. Его вводят в дозе 0,2 мл строго внутрикожно: свиньям в среднюю часть наружной поверхности уха, крупному и мелкому скоту в область подхвостового зеркала или промежности, лошадям в среднюю треть шеи.

Реакцию у свиней учитывают через 5. 6 ч и считают положительной при наличии гиперемии и инфильтрата диаметром 10 мм и более в месте введения аллергена, при наличии утолщения кожной складки на 3 мм и более. Такое животное признают больным и изолируют. Если у животного регистрируют сомнительную реакцию, аллерген вводят повторно через 24 ч. Если после повторного введения аллергена у животного регистрируют положительную или сомнительную реакцию, его признают больным и изолируют. Оценку реакции у лошадей, крупного и мелкого рогатого скота проводят через 20. 24 ч. Реакция считается положительной и свидетельствует о наличии иммунитета у вакцинированного животного, если на месте введения аллергена обнаружен инфильтрат при утолщении кожной складки на 3. 10 мм. Гипераллергическая реакция (обширный болезненный отек, утолщение кожной складки более чем на 10 мм) дает основание подозревать заражение сибирской язвой. В этом случае животных изолируют, проводят дополнительное исследование и лечат в соответствии с действующей инструкцией.

Для постановки посмертного диагноза в лабораторию направляют ухо, отрезанное со стороны, на которой лежит труп животного, или мазок крови из надреза уха. Ухо туго перевязывают шпагатом у основания в двух местах и отрезают между перевязками. Место отреза на трупе прижигают. От трупов свиней направляют участки отечной ткани, лимфатические узлы. Если подозрение на сибирскую язву возникло при вскрытии трупа (кроме трупов свиней), на исследование направляют часть селезенки. По результатам микроскопического исследования ветеринарная лаборатория немедленно дает предварительный ответ. Для выдачи окончательного заключения делают посевы патологического материала на питательные среды, заражают лабораторных животных, при необходимости ставят реакцию преципитации, идентифицируют выделенные культуры. Загнивший патологический материал исследуют только в реакции преципитации.

Взятие материала от вынужденно убитых животных и его исследование проводят в соответствии с действующим ГОСТ 21234—75 «Мясо. Методы бактериологического анализа», действующими Правилами ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясных продуктов.

По результатам лабораторных исследований диагноз на сибирскую язву считается установленным при получении одного из следующих показателей: 1) выделения из патологического материала культуры со свойствами, характерными для возбудителя сибирской язвы, и гибели хотя бы одного лабораторного животных из двух зараженных исходным материалом или полученной культурой с последующим вьщелением ее из органов павшего животного; 2) отсутствии в посевах из исходного материала роста культуры, но гибели хотя бы одного лабораторного животного из двух зараженных и выделению из его органов культуры с признаками, характерными для возбудителя сибирской язвы; 3) положительной реакции преципитации при исследовании кожсырья и загнившего патологического материала.

Для дифференциации возбудителя сибирской язвы от микробов-сапрофитов, близкородственных В. anthracis (В. cereus, В. mycoides, В. thuringiensis и др.), широко распространенных в природе, применяют методы, выявляющие фенотипические различия штаммов, в том числе определение характера роста на различных питательных средах, чувствительность к пенициллину и бактериофагу, образование капсул, тест на образование сибиреязвенного токсина, РП в геле, РИГА в комплексе с другими бактериологическими методами (микроскопия, культивирование, биопроба на лабораторных животных) и др.

Для выявления обсемененности спорами сибирской язвы различных объектов внешней среды разработаны Методические указания по индикации возбудителя сибирской язвы в объектах внешней среды и кормах с помощью твердофазного иммуноферментного метода.

В настоящее время для проведения более тонкого и углубленного эпизоотологического анализа вспышек болезни разработаны рестрикционный анализ, молекулярная гибридизация, полимеразная цепная реакция (ПЦР).

При дифференциальной диагностике у коров необходимо исключить эмфизематозный карбункул, злокачественный отек, пастереллез (отечная форма) и пироплазмидозы, тимпанию незаразного характера, лейкоз. У овец — брадзот, инфекционную энтеротоксемию и пироплазмидозы; у свиней — рожу, чуму, пастереллез; у лошадей — злокачественный отек, сверхострое течение инфекционной анемии, пироплазмидозы, петехиальную горячку, кормовые отравления.

Основой дифференциальной диагностики является комплексный метод исследования, в котором результаты лабораторной диагностики имеют решающее значение.

Тема 7 «Лабораторная диагностика сибирской язвы»

Цель – формирование практических умений проводить лабораторную диагностику сибирской язвы, формирование знаний о сущности и технике проведения бактериологических и серологических методов исследований, умений выделять биологические особенности возбудителя, работая с лабораторным оборудованием, делать заключение по изученному материалу, навыков работы с источниками информации, сопоставление биологических особенностей сибиреязвенных бацилл

План

1. Патологический материал для лабораторного исследования.

2. Бактериологические методы диагностики сибирской язвы.

3. Серологические методы диагностики сибирской язвы.

Материальное обеспечение: микроскоп, толстые мазки крови, марлевые повязки, краски по Граму, спиртовки, сибиреязвенный антиген, сибиреязвенная преципитирующая сыворотка, экстракт из кож, уленгутовские пробирки и воронки, пастеровские пипетки, культура возбудителя сибирской язвы на МПА, МПБ, МПЖ, спички, тампоны с 70 %-ым спиртом, пробы кожевенно-мехового сырья, набор для постановки реакции преципитации (РП). Биологические препараты: антиген сибиреязвенный, преципитирующая сибиреязвенная сыворотка, вакцины, гипериммунная сыворотка. Таблицы (Морфология возбудителя сибирской язвы; Характер роста на питательных средах МПБ, МПЖ, МПА; РП).

Теоретический материал

Сибирская язва (Anthrax) – зооантропоноз. К ней восприимчивы животные многих видов, особенно травоядные, и человек. Инфекционный процесс протекает преимущественно остро с явлениями септицемии или с образованием различной величины карбункулов. Возбудитель сибирской язвы – Bacillus anthracis (Koch, 1872) – типичный представитель патогенных бацилл. Относится к семейству Bacillaceae и роду Bacillus. Этот микроб часто называют бациллой антракса.

В случае гибели животных с подозрением на сибирскую язву трупы вскрывать запрещено – их сжигают. Для лабораторного исследования отправляют ушную раковину с нижней стороны (на которой лежал труп). Предварительно ухо перевязывают в двух местах крепким шпагатом, отрезают, место отреза немедленно прижигают, чтобы предотвратить истечение крови и обсеменение почвы возбудителем (споры сибиреязвенных бацилл сохраняются в почве сотни лет). Ухо заворачивают в марлю, пропитанную 3%-ным раствором борной кислоты, помещают в двойной полиэтиленовый мешочек и транспортируют в герметичной емкости.

В лабораторию можно направлять толстые мазки крови из надреза сосудов уха, мазки кладут в чашки Петри или другую емкость, на которой делают надпись: «Мазок не фиксирован!».

При возникновении подозрения на сибирскую язву во время убоя и переработки туш, убой немедленно приостанавливают, берут пробу из измененных органов и тканей и немедленно направляют в лабораторию.

От свиней направляют заглоточные и подчелюстные лимфоузлы, отечную ткань в области шеи, так как у них болезнь протекает в ангинозной форме. Таким же образом поступают при поступлении туш мяса на рынки.

В лаборатории из доставленного материала немедленно готовят мазки, окрашенные по Граму и специальным методом на капсулу (Ольта, Михина). При обнаружении в мазках цепочек крупных Гр+ палочек, окруженных капсулой, немедленно дают предварительный ответ по месту гибели животных, убоя или экспертизы, ставят в известность ветеринарную и медицинскую службу.

Сибиреязвенную тушу со шкурой и органами отправляют на утилизацию. Утилизируют также и продукты убоя.

Исследованию на сибирскую язву подлежит также мясо, полученное от вынужденно убитых животных.

При необходимости исследуют пробы почвы (особенно в местах старых скотомогильников), пробы воды и других объектов внешней среды.

1. Микроскопия мазков из исследуемого материала, окрашенных по Граму и специальным методом на капсулу. В мазках из патологического материала, из крови, органов обнаруживают короткие цепочки Гр+ палочек, окруженных капсулой. (Необходимо иметь в виду, что капсула образуется только в организме!). Для обнаружения (индикации) возбудителей сибирской язвы во внешней среде используют метод флюоресцирующих антител (МФА).

2. Выделение чистой культуры возбудителя проводят путем посева на обычные питательные среды МПБ, МПА, МПЖ, на которых наблюдается характерный рост.

На МПБ – бульон прозрачный, на дне осадок в виде комочка ваты из переплетенных длинных цепочек палочек.

На МПА – крупные шероховатые колонии с бахромчатыми краями. Под малым увеличением напоминают гриву льва, локоны волос, голову медузы Горгоны.

На МПЖ – при посеве уколом рост в виде «перевернутой» елочки, так как микроб является аэробом. При необходимости выделенную культуру дифференцируют от почвенных спорообразующих бацилл, имеющих схожие морфологические и культуральные свойства. Это Bacillus anthracoides, Bac. pseudoanthracis и др, которые не патогенны.

3. Биопроба проводится путем заражения белых мышей эмульсией из материала в дозе 0,2 – 0,5 мл, подкожно, в области корня хвоста, кроликам 0,3 мл. Гибель наблюдается в течение 1 – 3-х суток. Из органов павших животных делают мазки и посев на питательные среды.

4. Серологический метод – РП, основан на обнаружении в материале сибиреязвенного антигена, образующегося при гибели и разрушении микробных клеток. При этом, из патологического материала или кожевенного сырья готовят экстракт (вытяжку) путем кипячения в течение 30 мин или настаивания в течение 16 – 18 ч. Если требуется срочный ответ, то путем кипячения. Полученный экстракт фильтруют и используют в качестве материала для обнаружения сибиреязвенного антигена. РП ставят методом наслаивания или подслаивания.

Предварительный ответ ставят на основании микроскопии, окончательный – на основании выделения чистой культуры возбудителя и положительной биопробы. Срок исследования при положительном ответе до 3-х суток, при отрицательном – до 10 суток.

Теоретический материал по теме занятия студенты конспектируют в тетрадь и выполняют практические задания.

Практическое задание 1: Составьте схему проведения лабораторного исследования на сибирскую язву.

Этапы выполнения задания:

1 Отберите патологический материал для бактериологического и серологического исследований.

2 Определите последовательность и технику выполнения бактериологических методов диагностики.

3 Определите необходимость и порядок выполнения серологического исследования биоматериалов.

4 Схему исследования зарисуйте в тетрадь.

Практическое задание 2: Определите морфологические и тинкториальные свойства микробной культуры.

Этапы выполнения задания:

1 Приготовьте мазки-препараты (3 штуки) из биоматериала (толстый мазок крови), зафиксируйте их.

2 Окрасьте первый мазок-препарат по методу Грама.

3 Окрасьте второй мазок по Михину.

4 Окрасьте третий мазок по Пешкову или Златогорову.

5 Микроскопируйте окрашенные препараты, зарисуйте и опишите морфологические особенности возбудителя в тетрадь, отчитайтесь преподавателю.

Практическое задание 3: Определите культуральные свойства микробной культуры.

Этапы выполнения задания:

1 Опишите характер роста микробной культуры на среде МПБ.

2 Опишите характер роста микробной культуры на среде МПА.

3 Опишите характер роста микробной культуры на среде МПЖ.

4 Проанализируйте культуральные свойства изученной микробной культуры и сделайте заключение о соответствии ее сибириязвенным бациллам

Практическое задание 4: Проведите серологическое исследование кожевенно-мехового сырья на сибирскую язву.

Этапы выполнения задания:

1 Подготовьте компоненты реакции преципитации к исследованию.

2 Поставьте реакцию преципитации (РП) по Асколи и проведите ее учет.

3 Зарисуйте результаты реакции в контрольной и опытной пробирках, обозначив компоненты реакции.

Практическое задание 5: Проведите контроль биологических препаратов, применяемых при сибирской язве.

Этапы выполнения задания:

1 Определите назначение биологического препарата (диагностические, профилактические, лечебные), способ применения.

2 Определите пригодность препарата к использованию, обратите внимание на срок годности препарата, целостность упаковки, соответствие содержимого ампулы (флакона и др.) описанию в наставлении к препарату.

3 Полученные результаты внесите в таблицу рабочей тетради, проанализируйте и сделайте заключение по каждому препарату.

Вопросы и задания для контроля знаний. 1 Какими морфологическими особенностями обладает возбудитель сибирской язвы. 2 Чем обусловлена высокая устойчивость возбудителя во внешней среде. 3 Назовите методы лабораторной диагностики сибирской язвы. 4 Какие лабораторные животные восприимчивы к возбудителю сибирской язвы? 5 Назовите биологические препараты, применяемые при сибирской язве. 6 При каких условиях и где возбудитель образует спору и капсулу? 7 На основании результатов каких исследований, устанавливают окончательный диагноз на сибирскую язву? 8 Какой биоматериал берут от трупа животного при подозрении на сибирскую язву? 9 В каком случае обязательно проводить исследование кожевенно-мехового сырья на сибирскую язву?

Ссылка на основную публикацию